3/1:20821

2.8.21. ИСПЫТАНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ НА

ПРИСУТСТВИЕ АРИСТОЛОХИЕВЫХ КИСЛОТ

ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ. Аристолохиевые кислоты относятся к высокотоксичным

веществам, обладающим канцерогенным действием. По возможности все манипуляции

проводят в вытяжном шкафу. Вследствие электростатических свойств данных

эти кислоты, но может быть фальсифицировано с использованием материала

растительного происхождения, содержащего аристолохиевые кислоты. Методики А и В

предназначены для скрининга лекарственного растительного сырья на присутствие

аристолохиевых кислот в установленных пределах, как правило дополнительно проводят

макроскопические и (или) микроскопические испытания с целью исключения наличия

материала растительного происхождения, содержащего аристолохиевые кислоты.

Методики А и В предназначены для определения аристолохиевых кислот в лекарственном

растительном сырье, которое по хемотаксономическими маркерам не должно содержать

эти кислоты, но может быть фальсифицировано с использованием материала

Методика С используется для подтверждения присутствия аристолохиевой кислоты I в

концентрации, равной или превышающей 2 ppm, в том числе в случае, если результаты

хроматографического исследования указывают на присутствие аристолохиевой кислоты I.

Методики А, В и С не предназначены для испытания лекарственного растительного

сырья, в котором аристолохиевые кислоты образуются в качестве вторичных метаболитов.

В этом случае необходимы иные валидированные методики.

МЕТОД А: ИСПЫТАНИЕ НА ПРИСУТСТВИЕ АРИСТОЛОХИЕВЫХ КИСЛОТ

прибавляют 10,0 мл смеси растворителей, обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин и

центрифугируют.

Раствор сравнения (а). Количество СО ГФ РК (EP HRS) аристолохии, соответствующее

0.10 мг аристолохиевой кислоты I, диспергируют в 20.0 мл смеси растворителей,

обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин и центрифугируют.

Раствор сравнения (b). 1.0 мл раствора сравнения (а) доводят метанолом Р до объема

25.0 мл.

Условия хроматографирования:

– наносимый объем пробы: 20 мкл в виде полос длиной 8 мм;

– пробег фронта подвижной фазы: более 6 см;

– высушивание: в потоке холодного воздуха в течение 5 мин;

– детектирование: опрыскивание раствором 100 г/л олова (II) хлорида Р в

хлороводородной кислоте разбавленной P до тех пор, пока пластинка не станет слегка

влажной, нагревание при температуре 100 °C в течение 1 мин; просматривание в

ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм.

F

– на хроматограмме раствора сравнения (б) должна обнаруживаться, по крайней мере,

одна из указанных зон, соответствующая концентрации 2 ppm аристолохиевой кислоты

I.

Требование:

– на хроматограмме испытуемого раствора не должны обнаруживаться зоны,

соответствующие по расположению и флуоресценции зонам аристолохиевых кислот на

хроматограмме раствора сравнения (а).

МЕТОД В: ИСПЫТАНИЕ НА ПРЕДЕЛЬНОЕ СОДЕРЖАНИЕ АРИСТОЛОХИЕВОЙ

КИСЛОТЫ I

Жидкостная хроматография (2.2.29).

Испытуемый раствор. 2.0 г измельченного испытуемого образца (710) (2.9.12) помещают

во флакон вместимостью 250 мл из коричневого стекла с завинчивающейся крышкой,

прибавляют 100.0 мл смеси растворителей, перемешивают в течение 30 мин со скоростью

около 300 об/мин и фильтруют через мембранный фильтр с номинальным размером пор

0.45 мкм.

Раствор сравнения (а). Содержимое флакона с СО ГФ РК (EP CRS) аристолохиевой

кислоты I растворяют в смеси растворителей до получения раствора с концентрацией 0.04

Условия хроматографирования:

– колонка: длиной 0,15 м и внутренним диаметром 2,1 мм; заполненная силикагелем

– температура колонки: 40 °C;

– подвижные фазы:

– скорость подвижной фазы: 0,3 мл/мин;

– детектор: спектрофотометрический, длина волны 390 нм;

– объем вводимой пробы: по 25 мкл.

Пригодность хроматографической системы:

Требование:

– на хроматограмме испытуемого раствора не должны обнаруживаться пики,

соответствующие по времени удерживания пику аристолохиевой кислоты I (2 ppm) на

хроматограмме раствора сравнения (а).

МЕТОД С: ПОДТВЕРЖДАЮЩЕЕ ИСПЫТАНИЕ НА АРИСТОЛОХИЕВУЮ КИСЛОТУ

I

прибавляют 100.0 мл смеси растворителей, обрабатывают ультразвуком в течение 30 мин

и фильтруют через мембранный фильтр с номинальным размером пор 0.45 мкм.

Раствор сравнения (а). Содержимое флакона с СО ГФ РК (EP CRS) аристолохиевой

кислоты I растворяют в смеси растворителей до получения раствора с концентрацией

0.04 мкг/мл.

Раствор сравнения (b). Готовят раствор с концентрацией 0.45 мкг на 10 мл как описано в

сопроводительной документации, прилагаемой к СО ГФ РК (EP CRS) аристолохиевой

кислоты I.

– температура: 40 °C;

– подвижные фазы:

– подвижная фаза А: муравьиная кислота безводная Р – раствор 1 г/л аммония

– подвижная фаза Б: муравьиная кислота безводная Р – раствор 1 г/л аммония

– объем вводимой пробы: по 20 мкл; вводят раствор сравнения (а) дважды,

испытуемый раствор дважды, раствор сравнения (а) дважды и затем раствор

сравнения (б) дважды;

– детектор: масс-детектор как описано ниже (система А или система В).

Регулируют скорость подвижной фазы, температуру колонки и настройки детектора таким

образом, чтобы выдерживались критерии пригодности хроматографической системы.

‒ контролируемые дочерние ионы: m/z 252, m/z 268 и m/z 281.

Пригодность хроматографической системы:

– отношение «сигнал/шум»: не менее 100 для контролируемых дочерних ионов на

хроматограмме раствора сравнения (а);

– проверка влияния матрицы: среднее значение двух величин отношений для раствора

сравнения (б) должно находиться в интервале ±40 % от среднего значения двух

величин отношений для раствора сравнения (а); в противном случае необходимо

растворе; рассчитывают среднее значение двух величин отношений сигналов при

значении времени удерживания аристолохиевой кислоты I в растворе сравнения (а);

если среднее значение двух величин отношений для испытуемого раствора находится в

интервале ±40 % от среднего значения двух величин отношений для раствора

сравнения (а), то наличие аристолохиевой кислоты I в испытуемом растворе считается

установленным.

Система В.

Масс-спектрометр с тройным квадруполем и электрораспылительной ионизацией и

Настраивают параметры масс-спектрометра для MS

-режима в соответствии указаниям,

приведенным ниже:

‒ ион-предшественник: m/z 359 [M + NH

]

;

‒ контролируемые дочерние ионы: m/z 265, m/z 281 и m/z 296.

Пригодность хроматографической системы:

величин отношений для раствора сравнения (а); в противном случае необходимо

изменить настройки детектора.

Требования:

– рассчитывают среднее значение величин отношений (265/281 и 296/281) относительной

интенсивности для трех дочерних ионов аристолохиевой кислоты I в испытуемом

растворе; рассчитывают среднее значение двух величин отношений сигналов при

значении времени удерживания аристолохиевой кислоты I в растворе сравнения (а);

если среднее значение двух величин отношений для испытуемого раствора находится в